dna提取试剂盒操作步骤及注意事项

dna的提取可以简单的分为裂解和纯化两大步骤,裂解是破坏样本细胞结构,从而使样本中的dna游离在裂解体系中的过程,纯化则是使dna与裂解体系中的其它成分,如蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。

通过破坏样本细胞结构,从而使样本中的dna在裂解系统中游离,提取dna,提取dna,使dna与裂解系统中的其他成分完全分离,使dna与裂解系统中的其他成分完全分离。

dna提取试剂盒操作步骤及注意事项

dna提取试剂盒的操作步骤:

1、样本的处理:a、在血液样本中加入2-3倍体积的红细胞裂解液,充分颠倒混匀,12000rpm离心1min,小心吸去上清,沉淀应为白色或淡红色,如果裂解不彻底,可重复以上述步骤一次。向沉淀中加200ul溶液YA,振荡至彻底混匀。

b、如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量为5-20u1,不需要再用红细胞裂解液处理,直接加200ul溶液YA,振荡至彻底混匀。

2、向悬浮液中加入20ul的RNaseA(10mg/ml),充分颠倒混匀,室温放置10min。

3、加入20ul的蛋白酶K(10mg/ml),充分颠倒混匀,65℃水浴消化30-60min,消化期间可颠倒离心管混匀数次,直至样本消化完全为止。

4、加入200ul溶液YB,再加入200ul无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响dna的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,室温放置2min。

5、12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

6、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

8、12000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

9、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm离心1min。

10、离心所得洗脱液可再加入吸附柱中,12000rpm离心2min,即可得到高质量的基因组dna。

dna提取试剂盒操作步骤及注意事项

dna提取试剂盒注意事项:

样本的采集和保存是dna提取的第一步,合适的样本采集和保存方法对于dna提取的成败至关重要,尤其是有些珍贵样本,其采集和保存的方式更是需要特别关注。

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