基因芯片的制备方法有哪些?基因芯片3种制备方法

芯片种类较多,制备方法也不尽相同,常见的芯片可分为两大类:一类是原位合成;一种是直接点样。关于这两种方法,我们已经比较详细地介绍过了。本文主要介绍几种大家不太常用的、更为先进的方法。

电子芯片

电子芯片是由美国Nanogen公司开发的,目前国内清华大学和复旦大学也在开发这一技术。这种芯片为带有阳电荷的硅芯片、芯片经热氧化,制成1mm×1mm的阵列、每个阵列含多个微电极,在每个电极上通过氧化硅沉积和蚀刻制备出样品池。将连接链亲和素的琼脂糖覆盖在电极上,在电场作用下生物素标记的探针即可结合在特定电极上。电子芯片最大特点是杂交速度快,可大大缩短分析时间。制备复杂、成本高是其不足。

基因芯片
基因芯片

三维芯片

三维芯片是由美国的Packard、摩托罗拉、Argonne国家实验室三家机构与俄罗斯Engelhardt分子生物学研究所合作开发的一种芯片技术。三维生物芯片实质上是一块显微镜载玻片,其上有10,000个微小聚乙烯酰胺凝胶条,每个凝胶条可用于靶DNA,RNA和蛋白质的分析。先把乙知化合物加在凝胶条上,再用3cm长的微型玻璃毛细管将待测样品加到凝胶条上。每个毛细管能把小到0.2nl的体积打到凝胶上。以上几家机构合作研究的生物芯片系统具有其它生物芯片系统不具有的几个优点。

一是凝胶的三维化能加进更多的已知物质,增加了敏感性。

二是可以在芯片上同时进行扩增与检则。一般情况下,必须在微量多孔板上先进行PCR扩增,再把样品加到芯片上,因此需要进行许多额外操作。本芯片所用凝胶体积很小。使PCR扩增体系的体积减小1,000倍(总体积约纳升级),从而节约了每个反应所用的PCR酶(约减少100倍)。

三是以三维构象形式存在的蛋白和基因材料可以其天然状态在凝胶条上分析,可以进行免疫测定,受体-配体研究和蛋白组分析。

流过式芯片

CeneLogic正在开发一种在芯片片基上制成格栅状微通道,CeneLogic设计及合成特定的寡核苷酸探针,结合于微通道内芯片的特定区域。从待测样品中分离DNA或RNA并对其进行荧光标记,该样品流过芯片,固定的寡核苷酸探针捕获与之相互补的核酸,采用CeneLogic’s信号检测系统分析结果。

流通式芯片用于高通量分析已知基因的变化,其特定在于

⑴敏感性高:由于寡核苷酸吸附表面的增大,流过式芯片可监测稀有基因表达的变化;

⑵速度快:微通道加速了杂交反应,减少了每次检测所需时间;

⑶价格降低:由于采用了特殊的共价化学技术将寡核苷酸吸附于微通道内,使每一种流过芯片可反复使用多次,从而使其成本降低。

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